小鼠臟器組織中性粒細(xì)胞分離液KIT說(shuō)明書
 
 
本品用于分離小鼠臟器組織中性粒細(xì)胞
 
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號(hào)	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	樣本稀釋液	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈(zèng)品）	2010X1118	200ml
D	紅細(xì)胞裂解液（贈(zèng)品）	NH4CL2009	100ml
E	紅細(xì)胞沉降液（6%羥乙基淀粉）	HES-TBD550-80	80ml
F	試劑 F	F2013TBD	200ml
G	說(shuō)明書		1 份

 
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
 
【檢驗(yàn)方法】
 
全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
 

• 首先制備組織單細(xì)胞懸液，制備方法詳見(jiàn)“鼠組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。

 

• 取一支 15ml 離心管，先加入分離液 1：3ml，后加入 80%濃度分離液 1 溶液（分離液 1：

 
樣本稀釋液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。
 

• 用吸管小心吸取細(xì)胞懸液樣本加于分離液之液面上，650-800g ，離心 20-30min（注：如改變樣本及分離液用量，需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時(shí)間，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果）。

 

• 離心后，稀釋液層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層，取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層（會(huì)有少量紅細(xì)胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min。

 

• 離心后棄上清，后可通過(guò)兩種方法去除紅細(xì)胞。

 
方法一：細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞（具體方法參見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液說(shuō)明書”）。
 
方法二：
 
1.  細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸，加于 3ml 分離液 1 之液面上，400g 離心 20min。

• 取白色環(huán)狀細(xì)胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復(fù)洗滌 2-3 次，獲得目的細(xì)胞（如仍有少量紅細(xì)胞混雜，使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞）。

 
分離圖例：
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項(xiàng)】
 

• 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

 

• 本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

 

• 分離液用量大于骨髓單細(xì)胞懸液樣本量時(shí)，分離效果更佳。

 

• 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助.

 

• 請(qǐng)勿使用具有紅細(xì)胞保護(hù)成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細(xì)胞不能完全沉至離心管底部）。

 
【儲(chǔ)存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
 
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】