前言

免疫檢查點抑制劑的出現(xiàn)徹底改變了某些癌癥的治療。然而，大多數(shù)實體瘤對現(xiàn)有的免疫治療反應仍然很差，PD－1靶向抗體治療黑色素瘤和肺癌的成功在其他腫瘤類型中并不常見。雖然大多數(shù)免疫治療方法側(cè)重于增強αβ－T細胞反應，然而仍然有其他具有抗腫瘤潛力的淋巴細胞亞群浸潤在腫瘤周圍。卵巢癌對單免疫檢查點阻斷劑無效，在腫瘤中約6％的造血細胞（CD3＋T細胞的20％以上）是γδ－T細胞，其中包括Vγ9Vδ2淋巴細胞，外周血中最豐富的γδ－T細胞。盡管γδ－T細胞可以通過galectin－1而自發(fā)地在抗腫瘤上表現(xiàn)出調(diào)節(jié)活性，但其仍然需要一個強大的驅(qū)動力來發(fā)揮它們的抗腫瘤活性，以擴大免疫治療敏感腫瘤的范圍。

嗜乳脂蛋白（BTN）和類嗜乳脂蛋白（BTNL）的胞外結(jié)構(gòu)域與共刺激配體B7家族（包括PDL1、B7－H3和B7－H4）在結(jié)構(gòu)上相關(guān)。一些BTN和BTNL分子的多態(tài)性與炎癥性疾病相關(guān)，并且有人認為BTN3A家族可以調(diào)節(jié)抗原特異性αβ－T細胞反應，盡管機制目前還不清楚。最近，人們發(fā)現(xiàn)BTN和BTNL分子在調(diào)節(jié)γδ－T細胞功能中也起著關(guān)鍵作用，而同時發(fā)生的BTN3A1－BTN2A1相互作用對于T細胞受體（TCR）依賴的人類Vγ9Vδ2＋T細胞的激活至關(guān)重要。在體內(nèi)，這取決于磷酸化代謝物與B30．2胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的結(jié)合。然而，這些效應可以通過用CD277（BTN3A1－3）特異性抗體穩(wěn)定BTN3A1的胞外結(jié)構(gòu)域來模擬，這可能是通過BTN3A1的多聚化和自發(fā)V形構(gòu)象的構(gòu)象變化來完成的。

據(jù)此可以推測BTN3A1對αβ－T細胞的抑制作用只發(fā)生在其自發(fā)構(gòu)象中，而不需要BTN2A1，并且針對BTN3A1的抗體可以克服αβ－T細胞的抑制，同時誘導γδ－T細胞的抗腫瘤細胞毒性。試驗證明，抗CD277的抗體可以將BTN3A1從免疫抑制劑轉(zhuǎn)化為免疫刺激分子，從而動態(tài)激發(fā)通過協(xié)調(diào)αβ和γδ－T細胞驅(qū)動的抗腫瘤免疫，從而阻止卵巢癌的進展。

αβ－和γδ－T細胞

T細胞表面存在諸多標記，如T細胞受體（TCR）、白細胞分化抗原（CD）等，可根據(jù)這些標記將T細胞分為不同類型的亞群。根據(jù)T細胞表面TCR的類型，可將T細胞分為αβ－T細胞和γδ－T細胞兩類。其中αβ－T細胞即通常所稱的T細胞，其表面表達TCRαβ，占T細胞總數(shù)的95％以上；而γδ－T細胞表面表達TCRγδ，數(shù)量較少，在健康的成年人中，γδ－T細胞占外周血T細胞的1％～ 5％，主要分布于腸道、呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下組織，是構(gòu)成表皮內(nèi)淋巴細胞和黏膜組織上皮內(nèi)淋巴細胞的主要成分之一。大多數(shù)γδ－T細胞為 CD4－CD8－，即其細胞表面不表達CD4和CD8分子，但有少數(shù)可表達CD4或CD8，能夠參與免疫調(diào)節(jié)和免疫應答。

根據(jù)γδT細胞表面TCR的δ鏈的表達，可將其分為三個亞群：Vδ1T細胞，Vδ2T細胞和Vδ3T細胞。Vδ1T細胞主要存在于胸腺和黏膜上皮組織中，在外周血中也有少量存在，是黏膜表面最豐富的群落。Vδ1T細胞能分泌許多細胞因子并對腫瘤細胞產(chǎn)生細胞毒效應，在許多疾病中發(fā)揮著重要的作用；Vδ2T細胞主要分布在外周血中，占總γδT細胞數(shù)量的50％～90％。Vδ2T細胞表面的TCRγδ主要采用Vγ9和Vδ2的配對，能夠識別磷酸化抗原而活化，分泌穿孔素、顆粒酶等，產(chǎn)生細胞毒性。激活的Vδ2T細胞可以作為抗原提呈細胞發(fā)揮作用。Vδ3T細胞主要分布在肝臟，很少存在于血液中，是機體中數(shù)量最少的γδT細胞，僅占0．2％。Vδ3T細胞對靶細胞具有直接殺傷作用，還能夠分泌細胞因子。

BTN3A1在侵襲性人類腫瘤中過表達以抑制T細胞活性

通過對42例III／IV期人類高度惡性卵巢癌（HGSOCs）的蛋白裂解物進行了蛋白質(zhì)印跡分析發(fā)現(xiàn)，與良性卵巢腫瘤和正常組織相比，BTN3A1在惡性組織中嚴重過度表達。在所分析的四種三陰性乳腺癌中，發(fā)現(xiàn)一種特定的BTN3A1條帶的數(shù)量略低，證明BTN3A1的表達并不局限于卵巢惡性腫瘤。

通過對新鮮分離的卵巢癌和乳腺癌細胞的流式細胞術(shù)（FACS）分析表明，CD277在髓細胞和腫瘤細胞中高表達，而在淋巴細胞中表達較弱。

對398例其他HGSOCs和19例混合組織學乳腺癌的免疫組化分析證實，BTN3A1普遍表達于腫瘤床，通常定位于上皮細胞內(nèi)的膜和細胞質(zhì)。與其免疫抑制作用一致，200例卵巢癌中BTN3A1的平均高表達與患者生存率降低顯著相關(guān)。對另外13個HGSOC的流式細胞術(shù)分析證實，Vγ9Vδ2淋巴細胞占總T細胞的2．5％，γδ－T細胞浸潤與改善患者預后相關(guān)。

抗CD277抗體阻斷了BTN3A1介導的T細胞抑制

CTX－2026是通過酵母展示篩選到的抗BTN3A1的單克隆抗體，采用了糖基化的人IgG1主干，以避免交聯(lián)、抗體依賴性T細胞毒性和補體激活。同對照相比，CTX－2026和Vγ9Vδ2細胞的激動劑唑來膦酸鹽都恢復了BTN3A1依賴的αβ－T細胞的激活。此外，唑來膦酸鹽和CTX－2026還增強了對NY－ESO－1轉(zhuǎn)導的、HLA－A2＋BTN3A1＋OVCAR3細胞（NY－OVCAR3）的抗原特異性殺傷作用，并增強了自體腫瘤浸潤淋巴細胞從三個HGSOC中清除BTN3A1＋原發(fā)癌細胞的細胞毒性。

此外，利用CRISPR在BTN－K32 aAPCs細胞中敲除BTN2A1消除了Vγ9Vδ2 T細胞產(chǎn)生抗體和唑來膦酸鹽依賴的干擾素－γ（IFN－γ）的能力。然而，BTN2A1敲除的BTN－K32 aAPC仍保持了其抑制αβ－T細胞激活的能力，表明BTN3A1的αβ免疫抑制和Vγ9Vδ2免疫激活活性之間的轉(zhuǎn)換受BTN2A1信號的調(diào)節(jié)。

BTN3A1通過阻止CD45從免疫突觸分離來抑制T細胞

通過免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)CD45可能是BTN3A1發(fā)揮免疫抑制作用的效應分子。為了驗證這一點，試驗人員合成了一種CD3ζ－綠色熒光蛋白（GFP）的融合蛋白，并用于監(jiān)測在BTN3A1－Fc存在下OKT3誘導TCR觸發(fā)后CD3ζ－CD45共定位的程度。正如預期，與對照組Fc相比，TCR激活后CD45從CD3ζ分離。表明BTN3A1可能通過阻止CD45與免疫突觸的分離而阻斷TCR的觸發(fā)。